Flourescense microscopy: mga baruganan sa pamaagi

Pagsuyup ug re-emission sa kahayag sa dugang organikong ug organic pluwido mao ang resulta sa phosphorescence o flourescense. Ang kalainan sa taliwala sa mga butang katingalahan mao ang gidugayon sa sal-ang tali pagsuyup ug emission sa kahayag nagapangagi. Sa diha nga ang flourescense sa niini nga mga proseso mahitabo hapit dungan nga, samtang ang phosphorescence - uban sa pipila ka paglangan.

sa kasaysayan nga impormasyon

Sa 1852, ang Britanikong siyentipiko nga Stokes, una nga gihulagway flourescense. Siya gipaila-ila sa usa ka bag-o nga termino ingon sa usa ka resulta sa mga eksperimento sa fluorspar, nga emit pula nga kahayag sa ilalum sa ultraviolet sa kahayag. Stokes nakamatikod sa usa ka makapaikag nga panghitabo. Kini nakita nga ang wavelength sa fluorescent radiation mao ang kanunay nga mas dako pa kay sa dagan sa eksaytasyon kahayag.

Aron sa paglig-on sa mga pangagpas sa ika-19 nga siglo adunay daghang mga eksperimento. Ilang gipakita nga usa ka matang sa mga sampol fluoresce ubos sa impluwensya sa ultraviolet nga kahayag. Lakip sa mga materyales, sa taliwala sa ubang mga butang, nga kristal, salong, minerales, chlorophyll, krudo nga mga drugas, organikong mga compounds, bitamina, lana. Ang direkta nga paggamit sa tina alang sa biological nga mga pagsulay nagsugod lamang sa 1930

Flourescense microscopy: paghulagway

Ang pipila sa mga materyales nga gigamit sa unang katunga sa ika-20 nga pagtuon sa siglo nagpakita hatag-as nga kapihoan. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Salamat sa sa pasundayag, nga dili makab-ot pinaagi sa pagtandi sa mga pamaagi, ang pamaagi sa flourescense microscopy nahimong usa ka importante nga himan sa Biomedical ug biolohikal nga research. Parehong importante nga mga resulta nga nakuha, ug alang sa mga materyales.

? Unsa ang mga kaayohan ang sa pamaagi sa flourescense microscopy? Pinaagi sa paggamit sa bag-ong mga nga mga materyal nahimong posible ug sa pagpili sa kaayo sa piho nga cell submicroscopic components. Flourescense microscopy makamatikod ka molekula. Usa ka matang sa mga tina pagtugot sa pag-ila sa daghang mga butang sa makausa. Bisan pa sa limitado nga spatial nga resolusyon sa anggulo sa gigikanan utlanan sa mga ekipo, nga, sa baylo, nag-agad sa mga piho nga mga kabtangan sa mga sample, ang pag-ila sa mga molekula ubos sa lebel sa niini nga mao usab na sa mahimo. Nagkalain-laing mga sample human sa irradiation exhibit autofluorescence. panghitabo Kini nga kaylap nga gigamit sa petrology, botany, ang industriya sa semiconductor.

Features

Tun-i ang mga tisyu sa mananap o sa pathogens sa kasagaran komplikado o kaayo huyang o lig-on kaayo tino autofluorescence. Apan, ang bili sa mga pagtuon makabaton pasiuna ngadto sa mga sangkap sa materyal nga nakapukaw sa usa ka piho nga wavelength ug emitting sa gikinahanglan nga kahayag dagan intensity. Fluorochromes molihok ingon nga mga tina makahimo sa kinaugalingon nga gilakip sa istruktura (makita o dili makita). Mao kini ang sila sa usa ka taas nga selectivity sa target, ug ang quantum ani.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Flourescense microscopy nga kaylap nga gigamit sukad sa pag-anhi sa natural ug artipisyal mga tina. Sila nanag-iya sa pipila ka intensity profile sa pagbuga ug eksaytasyon ug target sa piho nga biological nga target.

Pag-ila sa mga indibidwal nga mga molekula

Kasagaran, sa sulundon nga kahimtang, kamo mahimong magpalista sa usa ka lain nga elemento siga. Kay kini, sa taliwala sa ubang mga butang, kini mao ang gikinahanglan nga sa paghatag og usa ka igo ubos nga kasaba sa detector ug sa Optical background. Fluorescein molekula sa kapakyasan tungod sa photobleaching mahimong emit sa 300 ka libo. Photon. Sa 20% collection efficiency sa mga proseso ug magparehistro sila sa usa ka kantidad sa mga 60 ka libo.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Flourescense microscopy base sa pagdahili photodiodes o electronic multiplication, nagtugot sa mga tigdukiduki sa pagtuman sa kinaiya sa tagsa-tagsa molekula pinaagi sa ikaduha, ug sa pipila ka mga kaso bisan minutos.

komplikado

Ang usa ka hinungdanong isyu pabor sa pagpanumpo sa Optical kasaba background. Tungod sa sa kamatuoran nga daghan sa mga materyales nga gigamit sa sa disenyo sa mga pagsala ug mga lente ipakita sa pipila autofluorescence, ang mga paningkamot sa mga siyentipiko sa unang bahin sa yugto nga oriented sa sa produksyon sa mga sangkap nga may usa ka ubos nga flourescense. Apan, sunod-sunod nga eksperimento nga gipangulohan sa bag-ong mga konklusyon. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Sa partikular, kini nakita nga flourescense microscopy, base sa kinatibuk-ang internal nga pagpamalandong, nagtugot kini sa pagkab-ot sa usa ka ubos nga kagikan ug hatag-as nga intensity eksaytasyon kahayag.

mekanismo

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Ang mga baruganan sa flourescense microscopy, base sa kinatibuk-ang internal nga pagpamalandong mao ang paggamit sa magkalawos balod o magkalawos. Kini mahitabo sa utlanan tali sa media uban sa lain-laing mga refractive lab-a. Sa kini nga kaso, ang kahayag pinutol nga kahoy nga moagi sa mga prisma. Kini adunay usa ka hataas nga refractive sukaranan index.

Ang prisma tapad sa tubigon nga solusyon o bildo uban sa ubos nga sukaranan. Kon ang usa ka silaw sa kahayag nga gitumong niini sa usa ka anggulo nga mao ang labaw nga kritikal, ang pinutol nga kahoy nga hingpit nga namalandong gikan sa interface. panghitabo Kini, sa baylo, hinungdan nonpropagating balod. Sa laing mga pulong, ang namugna electromagnetic uma nga penetrates ngadto sa usa ka medium uban sa usa ka ubos nga refractive index sukaranan sa usa ka gilay-on nga ubos pa kay sa 200 nanometer.

Ang magkalawos nga halad intensity sa kahayag nga igo sa excite fluorophores. Apan, tungod kay sa iyang hilabihan gamay nga giladmon, gidaghanon sa iyang mahimong kaayo gamay. Ang resulta mao ang usa ka ubos nga-level nga background.

kausaban

Flourescense microscopy gibase sa kinatibuk internal nga pagpamalandong, mahimong ipatuman sa EPI-kahayag. Kini nagkinahanglan lente uban sa hatag-as nga gidaghanon nga lutsanan (sa labing menos 1.4, apan kini mao ang madanihon nga kini nakaabot 1.45-1.6), ug partially nalamdagan uma apparatus. ulahing Ang makab-ot sa usa ka gamay nga gidak-on nga dapit. Alang sa mas dako pagkapareha sa paggamit sa usa ka nipis nga singsing, nga gibabagan sa usa ka bahin sa sapa. Kay ang mga kritikal nga anggulo, human nga adunay usa ka kinatibuk-ang pagpamalandong, kita kinahanglan sa usa ka taas nga level sa pagpatipas sa pagpaunlod medium sa lente ug ang tabon nga bildo sa mikroskopyo.